Benzylpenicilline-kalium heeft een goed antibacterieel effect op streptococcus, streptococcus pneumoniae en stafylokokken die geen penicilline-enzym produceren. Het heeft een matige antibacteriële werking tegen enterococcus. Neisseria gonorrhoeae, neisseria meningitidis, corynebacterium diphtheriae, bacillus anthracis, actinomyces bovis, streptococcus candida, listeria listeriae, leptospira en treponema pallidum zijn gevoelig voor dit product. Dit product heeft ook een bepaalde antibacteriële werking tegen haemophilus influenzae en bordetella pertussis. Andere gramnegatieve aëroob of facultatief anaëroob hebben een slechte gevoeligheid voor dit product. Dit product heeft een goed antibacterieel effect op clostridium, anaëroob van spijsverteringsstreptokokken en bacil .