Benzylpenicillinkalium har god antibakteriel virkning på streptococcus, streptococcus pneumoniae og staphylococcus, som ikke producerer penicillinenzym. Det har moderat antibakteriel aktivitet mod enterokokker. Neisseria gonorrhoeae, neisseria meningitidis, corynebacterium diphtheriae, bacillus anthracis, actinomyces bovis, streptococcus candida, listeria listeriae, leptospira og treponema pallidum er følsomme over for dette produkt. Dette produkt har også en vis antibakteriel aktivitet mod haemophilus influenzae og bordetella pertussis. Andre gramnegative aerobe eller fakultative anaerobe har dårlig følsomhed over for dette produkt. Dette produkt har god antibakteriel virkning på clostridium, anaerob i fordøjelseskanalen streptococcus og bacillus .