La benzylpénicilline potassique a un bon effet antibactérien sur le streptocoque, le streptococcus pneumoniae et le staphylocoque qui ne produisent pas d'enzyme pénicilline. Il a une activité antibactérienne modérée contre les entérocoques. Neisseria gonorrhoeae, neisseria meningitidis, corynebacterium diphtheriae, bacillus anthracis, actinomyces bovis, streptococcus candida, listeria listeriae, leptospira et treponema pallidum sont sensibles à ce produit. Ce produit a également une certaine activité antibactérienne contre Haemophilus influenzae et bordetella pertussis. D'autres aérobies Gram négatif ou anaérobies facultatifs ont une faible sensibilité à ce produit. Ce produit a un bon effet antibactérien sur le clostridium, anaérobie du streptocoque digestif et du bacille .